来源TMRPublishingGroup
作者TraditionalMedicineResearch编辑部
弩药是一种特殊的苗药配方，记载于中国西晋时期。弩药包括五种草药（草乌、竹凌霄、黑龙骨、滇白珠和大血藤），具有麻醉、活血、祛伤、清除创伤和解毒的功能，在现代研究中表现出多种药理作用，包括镇痛和抗炎作用。弩药对多种疾病都有很好的治疗效果，如膝关节骨性关节炎、腰椎间盘突出症、颈椎病、带状疱疹后神经痛、类风湿性关节炎等。
弩药针是从弩药加上针头延伸出来的传统外部治疗方法，弩药的临床应用效果显著。具体来说，弩药针疗法就是将针头浸泡在弩药中，而后涂抹在疮口上进行治疗的一种方法，促进了药物的透皮吸收，使其直接到达患处，但是针灸疼痛、给药不准确、继发性感染和患者依从性差限制了其临床推广和应用。因此我们利用弩药最有效的成分是脂溶性成分这一特点，制备一种创新型o/w型微乳来解决这些问题。本研究建立了弩药微乳液制备方法，并对其质量进行了评价。
研究方法
通过单因素和伪三元相图，结合D型最佳混合设计，通过粒径、多分散指数、Zeta电位、微结构以及苯甲酰新乌头碱、苯甲酰次乌头碱、新乌头碱、过氧化氢和水杨酸甲酯的含量来优化弩炮药微乳剂的配方，评价最终处方。
研究结果
溶解度研究
弩炮药材提取物在不同类型的油、表面活性剂和助溶剂中的溶解度见表1。在选定的油类（油酸聚乙二醇甘油酯、油酸乙酯、月桂酸异丙酯和肉豆蔻酸异丙酯）中，该提取物在肉豆蔻酸异丙酯油中的溶解度最大（.73μg/mL）。在选定的表面活性剂（吐温80、聚氧乙烯蓖麻油-35、聚氧乙烯氢化蓖麻油-40和拉布罗索）中，提取物在聚氧乙烯蓖麻油-35（.73μg/mL）和吐温80（.6μg/mL）中的溶解度更大。在所选的辅助表面活性剂（甘油、异丙醇、绝对乙醇和聚乙二醇-）中，提取物在乙醇（.44μg/mL）和甘油（.25μg/mL）中的溶解度更大。因此，肉豆蔻酸异丙酯油是制备微乳剂的油相；表面活性剂和助表面活性剂仍需进行优化选择。
构建表面活性剂和助表面活性剂的伪三元相图
如图1A-B所示，聚氧乙烯蓖麻油-35作为一种表面活性剂，比吐温80提供了更多的微乳液区域（蓝色阴影）。因此，聚氧乙烯蓖麻油-35被选为制备微乳的表面活性剂。图1C-D显示了以IPM油为油相，聚氧乙烯蓖麻油-35为表面活性剂，以水为水相的乙醇和甘油的微乳体系。作为一种共表面活性剂，乙醇比甘油提供了更多的微乳液区域（蓝色阴影）。因此，选择乙醇作为制备微乳剂的助表面活性剂。
表面活性剂和助表面活性剂重量比对微乳区的影响
从五相图（图2）来看，在表面活性剂3：1的混合物中观察到最大的微乳区。在3：1的相图中，微乳区（蓝色阴影）随着乙醇比例的减少而扩大，而在1：3的相图中，微乳区则缩小了。
通过D-最佳混合设计优化微乳剂的配方
如表2所示，进行了16次实验的组成。油相、混合乳化剂和水对相对颗粒大小和聚合物分散性指数（PDI）的影响（图3）。当其他三个变量在优化范围内变化时，所有变量都保持在中心水平。油相和水对PDI的相对影响很小，且PDI随着混合乳化剂比例的增加而下降。水对平均粒径和油相的影响相对较小。另外，混合乳化剂对平均粒径的影响更大，当油相比例减少，混合乳化剂比例增加时，平均粒径就会减少；当油相比例增加时，平均粒径会随着油相比例的增加而持续增加。
利用Design-Expert软件进行多项式方程分析，并确定具有理想属性的微乳剂配方的成分。如表3所示，第四动力模型对Y1的拟合效果较好，而立方模型对Y2的拟合效果较好。Y1的P和失谐度值分别为0.和0.。同样，Y2的P值和失谐度值分别为0.和0.。这些结果表明，回归方程具有良好的拟合能力。通过等高线图和三维响应面图绘制的整体最佳区域显示，因子A（3%）、B（17.25%和5.75%）和C（74%）提供了Y1：18.02纳米和Y2：0.40的最佳响应。表4显示了上述处方比例的验证结果。Y1和Y2的平均实验值为17.88和0.12，而预测值分别为18.38和0.40。这些结果表明，该模型可以很好地预测实验结果。
HPLC的方法学验证及HPLC-DAD检测弩药微乳剂中的五种成分
本研究结果表明，苯甲酰新阿头酸、苯甲酰亚阿头酸、新阿头碱、水杨酸甲酯的线性关系良好，稳定性、重复性、回收率的RSD均小于3%，说明所建立的内容测定方法符合分析要求。
利用上述方法测定弩药微乳剂中苯甲酰新乌头碱、苯甲酰次乌头碱、新乌头碱、过氧化氢、水杨酸甲酯的含量，测得的含量分别为13.34±0.63、.05±2.43、43.45±0.86、.27±13.86和27.93±0.8μg/g。
弩炮药微乳剂的理化特征
三批弩药微乳剂均为灰褐色的透明液体，粘度低，分布均匀，丁达尔效应强。微乳剂的pH值为5.17±0.02，适用于皮肤。粒径、PDI、Zeta电位的平均值分别为19.83±0.78nm、0.15±0.02和-0.51±0.1mV。图5显示了微乳的微观结构的TEM图像。微乳剂显示出球状油球的均匀分布，没有任何结块，这表明所制备的微乳制剂分布均匀。三个批次的产品在离心和冻融试验中没有相分离，说明微乳具有良好的稳定性。
结论
弩药是一种具有苗族医药特色的外治制剂，在治疗膝关节骨性关节炎等慢性炎症方面具有明显优势。但是，传统的提取和制备方法难以满足临床需要和苗药的现代发展。本文采用醇提作为提取方法，利用伪三元相图和D型最佳混合设计筛选了微乳剂成分的种类和比例。因此，本研究为弩药的现代化提供了实验依据，为微乳剂在民族医药中的应用提供了可行性。
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